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紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)檢定過(guò)程中的注意事項(xiàng)

紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)是通過(guò)測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸收度，對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的儀器。 在生物制藥、精細(xì)化工、環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域有著廣泛應(yīng)用，并被納入《中華人民共和國(guó)強(qiáng)制檢定的工作計(jì)量器具明細(xì)目錄》， 需要根據(jù)檢定規(guī)程定期檢定。 雖然目前檢定機(jī)構(gòu)在檢定紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)時(shí)均嚴(yán)格執(zhí)行JJG178-2007《紫外、可見(jiàn)、近紅外分光光度計(jì)》檢定規(guī)程，但還是經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)對(duì)同一臺(tái)儀器在不同的檢定機(jī)構(gòu)給出的檢定結(jié)果不同，

判定不合格的儀器返廠修理時(shí)并未發(fā)現(xiàn)問(wèn)題的現(xiàn)象。

實(shí)際上很多時(shí)候并不是儀器出了問(wèn)題，只要檢定人員在檢定過(guò)程中注意一些細(xì)節(jié)問(wèn)題，就可以避免誤判情況的發(fā)生。

一、波長(zhǎng)示值誤差項(xiàng)目檢定中需注意的問(wèn)題

波長(zhǎng)示值誤差是一項(xiàng)重要指標(biāo)，JJG178-2007中對(duì)該項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)，有多種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)供選擇。 選擇哪一種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，要根據(jù)儀器的情況判定。 一般zui常用的波長(zhǎng)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是氧化鈥玻璃濾光片、鐠釹玻璃濾光片。 但由于氧化鈥玻璃等濾光片需要通過(guò)高等級(jí)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)對(duì)參考波長(zhǎng)定值后才可用于對(duì)等級(jí)相對(duì)較低的儀器進(jìn)行檢測(cè)，所以使用時(shí)需充分考慮定值時(shí)使用的紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的性能， 尤其需要考慮儀器的光譜帶寬， 定值用儀器的光譜帶寬多設(shè)定為2nm。 但大多數(shù)儀器的光譜帶寬是固定的， 而且較大， 尤其是低檔儀器， 如 752 型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)光譜帶寬為4nm。 表1、表2分別為同一臺(tái)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在其他條件不變的情況下，光譜帶寬分別設(shè)定為0.5nm、2.0nm、5.0nm時(shí)使用氧化鈥玻璃濾光片和鐠釹玻璃濾光片掃描得到的峰值數(shù)據(jù)， 可見(jiàn)當(dāng)儀器的光譜帶寬發(fā)生變化時(shí)，使用氧化鈥玻璃濾光片或鐠釹玻璃濾光片檢測(cè)得到的波長(zhǎng)誤差存在較大差異，對(duì)于光譜帶寬較大的儀器甚至部分波峰檢測(cè)不到。 而且對(duì)于具備自動(dòng)掃描功能的儀器，掃描速度同樣對(duì)檢測(cè)結(jié)果有不可忽視的影響，如表3所示。

如果定值機(jī)構(gòu)能夠分別給出濾光片在不同光譜帶寬下所對(duì)應(yīng)的峰值，詳細(xì)描述定值所用儀器的各項(xiàng)參數(shù)。 檢定員在檢定過(guò)程中根據(jù)被檢儀器的實(shí)際光譜帶寬選擇合理的參考值，并盡量將儀器掃描速度等參數(shù)設(shè)定為濾光片定值時(shí)所使用的紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的參數(shù)，將有效避免定值儀器與被檢儀器因參數(shù)設(shè)定的差異引入的測(cè)量誤差。 雖然鐠釹玻璃濾光片的波長(zhǎng)范圍可以達(dá)到（500～900）nm，但并不適合將鐠釹玻璃濾光片作為波長(zhǎng)示值誤差判定的*標(biāo)準(zhǔn)，原因是鐠釹玻璃濾光片的峰值并不尖銳，比較圓滑。 僅可作為對(duì)某一空白波段的補(bǔ)償。 例如使用氧化鈥玻璃濾光片作為主標(biāo)準(zhǔn)器檢測(cè)（200～700）nm范圍的波長(zhǎng)值，再用鐠釹玻璃濾光片補(bǔ)充（700～900）nm波段的波長(zhǎng)值。對(duì)于光譜帶寬不可調(diào)且較大的儀器如果使用濾光片檢定不合格時(shí)切不可急于判定，而應(yīng)該改用汞燈等自然標(biāo)準(zhǔn)重新對(duì)儀器波長(zhǎng)誤差進(jìn)行檢定，以此為依據(jù)作出判斷。

二、透射比示值誤差檢定中需注意的問(wèn)題

透射比示值誤差反映了儀器測(cè)光的準(zhǔn)確度， 使用的標(biāo)準(zhǔn)器通常為： 標(biāo)準(zhǔn)溶液、 金屬鍍膜濾光片和中性濾光片。 實(shí)際檢定中多使用金屬鍍膜濾光片和中性濾光片，其中金屬鍍膜濾光片可以滿(mǎn)足紫外光段和可見(jiàn)光段的檢定，中性濾光片僅可滿(mǎn)足可見(jiàn)光段的檢定。 檢定中經(jīng)常會(huì)發(fā)現(xiàn)部分單光束低端儀器（如752型、721型分光光度計(jì)）透射比示值誤差超差的現(xiàn)象， 實(shí)際上這種結(jié)果可能是由以下原因造成的：

1.分光光度 入射光的光斑 大大部分單光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)入射光的光斑較大，用濾光片檢定時(shí)，濾光片的支架的邊緣遮擋

了部分光，造成檢定結(jié)果超差。 解決方法：以空氣為參比，對(duì)分光光度計(jì)透射比調(diào)節(jié)100%時(shí)，在比色皿中插入未安裝濾光片的空白支架。

2. 定用 光片 光的反射引起的 差這種現(xiàn)象主要發(fā)生在使用金屬鍍膜濾光片檢定儀器透射比誤差時(shí)。 用于檢定儀器透射比誤差的理想濾光片應(yīng)能夠均勻地降低入射光的強(qiáng)度，不存在對(duì)入射光的反射。 但目前所使用的金屬鍍膜濾光片的表面均會(huì)對(duì)入射光產(chǎn)生一定的反射，造成測(cè)量誤差，這個(gè)現(xiàn)象在對(duì)使用透鏡式光路的低端紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)檢定中尤其明顯。 而且金屬鍍膜濾光片存在計(jì)量性能不穩(wěn)定的問(wèn)題， 由于該濾光片表面是一層鍍膜，如果鍍膜表面受到污染，在清理時(shí)很容易對(duì)鍍膜造成破壞，改變?yōu)V光片原有數(shù)值。 解決方法：使用金屬鍍膜濾光片對(duì)紫外光段的透射比誤差進(jìn)行檢定，使用中性濾光片對(duì)可見(jiàn)光段的透射比誤差進(jìn)行檢定，當(dāng)發(fā)現(xiàn)僅紫外光段透射比誤差不合格時(shí)， 使用標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行復(fù)測(cè)，以標(biāo)準(zhǔn)溶液的檢定結(jié)果作為紫外光段透射比誤差的zui終檢定結(jié)果。

3. 定用 光片入射面  所造成的 差

由于濾光片制作工藝水平的限制， 濾光片的厚度不可能*均勻，更不能保證濾光片放入比色皿架后， 入射光能夠*垂直照射在濾光片上， 這就造成同一個(gè)濾光片， 選擇的入射面不同時(shí)， 測(cè)得的透射比示值也是不同的，造成測(cè)量誤差，甚至誤判。解決方法： 對(duì)濾光片定值時(shí)， 如果定值機(jī)構(gòu)在定值時(shí)能夠考慮這個(gè)問(wèn)題，根據(jù)定值時(shí)的實(shí)際情況在濾光片上標(biāo)明入射光的方向或入射面，檢定儀器時(shí)根據(jù)定值機(jī)構(gòu)的標(biāo)注選擇濾光片入射面， 放置濾光片，就可以有效減小因?yàn)V光片入射面選擇不同造成的測(cè)量誤差。

三、結(jié)束語(yǔ)

紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的波長(zhǎng)示值誤差和透射比示值誤差是檢定過(guò)程中zui重要的兩個(gè)檢定項(xiàng)目，而且這兩個(gè)檢定項(xiàng)目在檢定過(guò)程中很容易因細(xì)節(jié)問(wèn)題注意不夠造成誤判， 本文主要介紹了筆者針對(duì)以上兩個(gè)項(xiàng)目在檢定過(guò)程中的一些體會(huì)和經(jīng)驗(yàn)， 希望能夠?qū)z定員的日常檢定有所幫助。