熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù),從各個角度反映了分子的成鍵和結(jié)構情況。熒光分光光度計具有靈敏度高、選擇性強、用樣量少、方法簡便、工作曲線線形范圍寬等優(yōu)點,可以廣泛應用于生命科學、醫(yī)學、藥學和藥理學、有機和無機化學等領域。
熒光分光光度計測試注意事項:
?、贅悠窇⒃谒拿嫱腹獾氖⒈壬?熒光池)中,如果是揮發(fā)性樣品應使用帶塞的熒光池。
?、谠跓晒夥治鰰r,為了得到穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù),一般需要開機預熱氙燈大約30min。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈,預熱時間可以縮短到10min左右。對某些易感光、易分解的熒光物質(zhì),盡量采用長波長、低人射光強度及短時間光照。
?、蹨囟茸兓梢馃晒鈴姸鹊母淖儭Mǔ=档蜏囟?,有利于提高熒光量子產(chǎn)率,熒光強度增大。溫度影響熒光強度的顯著程度因樣品而異,大部分熒光物質(zhì)的熒光強度受溫度影響不大,測試溫度變化不超過±3℃,對測試結(jié)果幾乎無影響。
?、墚敓晒馕镔|(zhì)是弱酸或弱堿時,溶液的pH對熒光強度有較大影響。因為弱酸或弱堿在不同酸度中,分子和離子的電離平衡會發(fā)生改變,而熒光物質(zhì)的熒光強度會因其離解狀態(tài)發(fā)生改變。
?、轃晒馕镔|(zhì)分子與溶液中其它物質(zhì)分子之間作用導致熒光強度降低,常見的熒光猝滅劑,如鹵素離子、重金屬離子、02、硝基化物質(zhì)、重氮化合物等。溶液中的溶解氧也能引起幾乎所有的熒光物質(zhì)產(chǎn)生不同程度的熒光熄滅現(xiàn)象,因此,在較嚴格的熒光實驗中必須除02。