紫外可見分光光度計在生物學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用

 紫外可見分光光度計在生物學(xué)的應(yīng)用分析中, 常見的有蛋白質(zhì)含量檢測;一般是在蛋白質(zhì)的吸收峰上作吸光度測定。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)對紫外光的主要吸收波長為280nm, 所以, 采用光度測量模式, 將儀器的波長GOTO 到蛋白質(zhì)的zui大吸收峰波長280nm 上, 測試其吸光度大小, 就可完成對蛋白質(zhì)的定量檢測。

目前, 紫外可見分光光度計的應(yīng)用主要是在定量分析方面。先從生命科學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用來介紹。紫外可見分光光度計在生命科學(xué)中應(yīng)用非常廣泛。zui主要的是以下5 個方面。

1. 蛋白質(zhì)分析工作中的應(yīng)用

紫外可見分光光度計在蛋白質(zhì)的分析中, zui主要的是作蛋白質(zhì)含量檢測;一般是在蛋白質(zhì)的吸收峰上作吸光度測定。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)對紫外光的主要吸收波長為280nm, 所以, 采用光度測量模式, 將儀器的波長GOTO 到蛋白質(zhì)的zui大吸收峰波長280nm 上, 測試其吸光度大小, 就可完成對蛋白質(zhì)的定量檢測。

2. 核酸分析工作中的應(yīng)用

紫外可見分光光度計在核酸分析中的應(yīng)用, 主要是用來對核酸的定量檢測; 因?yàn)楹怂岬奈辗逶?60nm。我們只要采用光度測量模式, 將紫外可見分光光度計的波長GOTO 到核酸的zui大吸收峰260nm 上, 測試其吸光度大小就是了。

3. 氨基酸分析工作中的應(yīng)用

紫外可見分光光度計在氨基酸分析中的應(yīng)用, 主要是用來對氨基酸的定量檢測。因?yàn)榘被釋ψ贤夤獾闹饕詹ㄩL為230nm, 所以, 我們只要采用光度測量模式, 將紫外可見分光光度計儀器的波長GOTO 到氨基酸的zui大吸收峰230nm 上, 就可測試其吸光度大小, 從而計算出氨基酸的含量。但是, 因?yàn)榘被岱治鰰r, 一般是將它溶解在水中, 而水在230 nm 附近有很多干擾吸收線, 所以, 在用紫外可見分光光度計對氨基酸分析檢測時, 要注意防止干擾的問題。此外, 還需注意: 只有少數(shù)氨基酸有紫外吸收, 多數(shù)氨基酸無紫外吸收或很弱, 測定時要衍生化后再測。

4. 糖類分析測試工作中的應(yīng)用

紫外可見分光光度計在糖的分析中, 主要是作定量檢測。因?yàn)樘菍ψ贤夤獾闹饕詹ㄩL為218nm, 所以, 對糖類進(jìn)行分析時, 只要采用光度測量模式, 將紫外可見分光光度計儀器的波長GOTO 到氨基酸的zui大吸收峰218 nm上, 就可測試其吸光度大小, 從而計算出糖的含量。

5. 多糖分析測試工作中的應(yīng)用

紫外可見分光光度計在多糖的分析中, 主要也是作定量檢測。因?yàn)槎嗵菍ψ贤夤獾闹饕詹ㄩL為206nm, 所以, 我們只要采用光度測量模式, 將紫外可見分光光度計儀器的波長GOTO 到多糖的zui大吸收峰206 nm 上, 就可測試其吸光度大小, 從而計算出多糖的含量。

但是多糖的分析難度很大。因?yàn)? 在206 nm 處的時候, 光源(氘燈) 的能量已經(jīng)很弱, 儀器光學(xué)系統(tǒng)的能量輸出也很低, 光電倍增管的靈敏度也很低, 206nm 左右的干擾也很大。所以, 用紫外可見分光光度計作多糖的分析是很難的事, 目前許多科學(xué)家正在研究中。