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:擬建立紫外分光光度計(jì)法測(cè)定氨基寡糖素水劑中有效成分氨基寡糖素的分析方法。根據(jù)農(nóng)藥的性質(zhì)，氨基寡糖素可以水解 成氨基單糖( D －葡萄糖胺) ，D －葡萄糖胺在堿性條件下與乙酰丙酮形成生色原，生色原在酸性反應(yīng)液中與對(duì)二甲氨基苯反 應(yīng)形成紅色物質(zhì)，用紫外分光光度計(jì)在560nm 處測(cè)定其吸光度。氨基寡糖素在 0． 033 ～ 0． 528 mg/mL 范圍內(nèi)，濃度與吸光度呈良 好的線性關(guān)系，該方法標(biāo)準(zhǔn)偏差0． 0001。該方法具有良好的精密度和準(zhǔn)確度，操作簡(jiǎn)單易行、重現(xiàn)性好。

氨基寡糖素( Amino Oligosaccharins) ，也稱為農(nóng)業(yè)殼 寡糖，其中文別名為殼寡糖低聚 － D 氨基葡萄糖，是根據(jù)植 物的生長(zhǎng)需要，采用*的生物技術(shù)生產(chǎn)而成，分為固態(tài)和 液態(tài)兩種類型。殼寡糖本身含有豐富的 C、 N，可被微生物分 解利用并作為植物生長(zhǎng)的養(yǎng)份。 自20 世紀(jì)60 年代以來，殼寡糖作為植物免疫激活因子 越來越受到人們的重視。殼寡糖對(duì)植物影響主要是誘導(dǎo)抗 性，促使植物 POD、SOD、PAL 活性大大提高，又促進(jìn)植物合 成植保素，激發(fā)植物木質(zhì)素的合成和積累，提高作物抗病性， 同時(shí)又促進(jìn)植物生長(zhǎng)。氨基寡糖素是從海洋生物外殼提取 而來的安全、無毒、無殘留的多糖類天然產(chǎn)物，經(jīng)酶解產(chǎn)生聚 合度為2 ～15 的寡聚糖，是一種新型的生物農(nóng)藥，對(duì)病毒、真 菌和細(xì)菌等等病原引起病害的防治均有一定的作用，并對(duì)病 原菌的生長(zhǎng)有一定的抑制作用。國(guó)內(nèi)研究者發(fā)現(xiàn)氨基寡糖 對(duì)蘋果花葉病、西瓜病毒病、枯萎病、辣椒疫病等多種病害均 有較好的防治。另外，氨基寡糖素還具有提高作物產(chǎn)量，促 進(jìn)作物生長(zhǎng)的作用。綜上所述，作為新型的生物農(nóng)藥，氨基 寡糖素的生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，應(yīng)用前景廣闊，但由于其組分并不 單一，產(chǎn)品質(zhì)量控制較為復(fù)雜，尚未發(fā)現(xiàn)用于農(nóng)藥制劑中質(zhì) 量分?jǐn)?shù)的測(cè)定方法，本篇文章擬參考氨基糖的特性反應(yīng)原理建立2%氨基寡糖素水劑中有效成分氨基寡糖素的檢測(cè)分析 方法。 1 實(shí)驗(yàn)部分 1． 1 氨基寡糖素理化性質(zhì) 氨基寡糖素分子式為( C6H11O4N) n( n≥2) ，其相對(duì)分子 質(zhì)量約為 322 ～ 100000，熔點(diǎn)為 190 ～ 194℃，沸點(diǎn)為 102℃， 蒸氣壓( 20℃) 為 2330Pa，20℃時(shí)在水中的溶解度為332． 22 g/L，常溫下穩(wěn)定。

1． 2 檢測(cè)方法 氨基寡糖素用濃鹽酸水解成單糖( D － 葡萄糖胺) 后， D －葡萄糖胺在堿性條件下與乙酰丙酮形成生色原，生色原在 酸性反應(yīng)液中與對(duì)二甲氨基苯反應(yīng)形成紅色物質(zhì)，以氨 基寡糖素標(biāo)準(zhǔn)品為對(duì)照，用分光光度計(jì)測(cè)定并計(jì)算氨基寡糖素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。 1． 3 實(shí)驗(yàn)試劑和溶液 氨基寡糖素標(biāo)準(zhǔn)品:已知準(zhǔn)確質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥99． 0%; 無水乙醇( 分析純) ; 醋酸( 分析純) ; 氫氧化鈉溶液:400g/L; 顯色液; 乙酰丙酮( 分析純) ; E 液:取1 mL 乙酰丙酮于24 mL 碳酸鈉溶液中( 用前配 置) ; 對(duì)二甲氨基溶液( 分析純) ; P 液:稱取0． 8 g 對(duì)二甲氨基溶液于30 mL 乙醇 濃鹽酸( 1 +1) 溶液中( 用前配置) 。 1． 4 UV1901PC雙光束紫外可見分光光度計(jì) ;電子天平。 1． 5 實(shí)驗(yàn)步驟 1． 5． 1 氨基寡糖素標(biāo)樣溶液的水解及吸光度測(cè)定 稱取適量氨基寡糖素標(biāo)樣，置于含 30 mL 濃醋酸的圓底 燒瓶中，加熱回流水解 3 h，然后用氫氧化鈉溶液中和至 pH 值為7． 0，轉(zhuǎn)移至100 mL 容量瓶中，加水定容至刻度，即為標(biāo) 準(zhǔn)氨基寡糖素水解定容液，取 1 mL 標(biāo)準(zhǔn)氨基寡糖素水解定 容液加入 100 mL 容量瓶中，加入 4 mL 水，再加入 1 mL E 液，于沸水浴中放置25min，至冰水浴中( 20℃ ～25℃) 1 h，作 三次重復(fù)，測(cè)定吸光度為 A1。 1． 5． 2 試樣溶液的水解與吸光度的測(cè)定 稱取含0． 05 g 氨基寡糖素試樣，置于含30 mL 濃醋酸的 水解裝置中，回餾水解 3 h，然后用氫氧化鈉中和 pH 值至 7． 0，轉(zhuǎn)移至100 mL 容量瓶中，用水定容至刻度，即為試樣水 解溶液。取1 mL 氨基寡糖素試樣水解定容液，加入 4 mL 水，再加入1 mL E 液，于沸水浴中放置25min，至冰浴中冷卻，然后加入 3 mL 無水乙醇，再加入 1 mL P 液，搖勻后 放置( 20 ～25℃) 1 h，作三次重復(fù)，測(cè)得樣品水解定容液的吸 光度為 A2。 同時(shí)按照標(biāo)樣溶液與試樣溶液的處理方法，作空白實(shí) 驗(yàn)，在相同的條件下，未見有吸收，即此方法整個(gè)過程中未有 雜質(zhì)干擾。 1． 5． 3 試樣質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)算 試樣中氨基寡糖素的質(zhì)量分?jǐn)?shù) X1 按公式( 1) 計(jì)算:
X1 =
A2·m1·P A1·m2
( 1)
式中: A1 －氨基寡糖素標(biāo)樣的吸光度; A2 －氨基寡糖素試樣的吸光度; m1 －氨基寡糖素標(biāo)樣的質(zhì)量， g; m2 －氨基寡糖素試樣的質(zhì)量， g; P －標(biāo)樣中氨基寡糖素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)， %。 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論 2． 1 水解過程酸的選擇 此實(shí)驗(yàn)過程中分別選用了濃鹽酸、濃醋酸和稀硫酸來對(duì) 氨基寡糖素進(jìn)行水解，但是通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，相同的質(zhì)量的氨 基寡糖素標(biāo)樣，用濃醋酸的一組，其在 560 nm 的條件下，吸 光度大，即水解*的溶劑是濃醋酸，稀硫酸一組，吸光 度小，由于濃硫酸具有強(qiáng)烈的腐蝕性，即未考慮。所以 后選擇用濃醋酸作為水解試劑。 2． 2 調(diào)節(jié) pH 值過程堿液的選擇 此過程由于水解完畢，酸的量是極其過量的，因此，要調(diào) 至中性，所以選用了濃度比較高的強(qiáng)堿溶液氫氧化鈉溶液。 2． 3 線性關(guān)系實(shí)驗(yàn) 分別移取方法1． 5． 1 中 0、0． 5、 1、 2、 4、6 mL 標(biāo)準(zhǔn)氨基寡 糖素水解定容液，進(jìn)行處理，測(cè)得吸光度值與濃度的關(guān)系。

3 結(jié)論 綜上所述，上述紫外分光光度計(jì)外標(biāo)法是可行、準(zhǔn)確、有 效且重現(xiàn)性好的氨基寡糖素測(cè)定方法，可以作為氨基寡糖素質(zhì)量分?jǐn)?shù)檢測(cè)的分析方法。